Abstract:
O desenvolvimento de métodos adequados que permitam o monitoramento de
resíduos e contaminantes em alimentos é de suma importância pois é a única forma de
garantir a segurança dos alimentos evitando danos à saúde do consumidor. Para isso, fazse
necessário que estes métodos sejam rápidos, fáceis e de baixo custo, capazes de
detectar a presença de resíduos em concentrações baixas e em diferentes matrizes.
Este trabalho consistiu no desenvolvimento de método para determinação de 5
sedativos e 14 β-bloqueadores em amostras de rim suíno e posterior análise por
Cromatografia Líquida Acoplada à Espectrometria de Massas em Série (LC-MS/MS). O
procedimento de extração que melhor se adequou para análise destes compostos consistiu
na pesagem de 2 g de amostra e adição de 10 mL de acetonitrila seguida de
homogeneização com auxílio de Ultra-Turrax e mesa agitadora. Após extração, as amostras
foram submetidas a duas técnicas de clean-up, sendo elas, congelamento do extrato à baixa
temperatura e extração em fase sólida dispersiva (d-SPE) utilizando como sorvente Celite®
545. Uma etapa de concentração foi realizada com auxílio de concentrador de amostras sob
fluxo de N2 e temperatura controlada. As amostras secas foram retomadas com metanol e
analisadas utilizando sistema LC-MS/MS com Ionização por Eletrospray (ESI), operando no
modo MRM positivo, coluna Poroshell 120 EC-C18 (3,0 x 50 mm, 2,7 μm) para separação
dos analitos, e gradiente de fase móvel composta por (A) solução aquosa acidificada com
0,1% de ácido fórmico (v/v) e (B) metanol 0,1% ácido fórmico (v/v).
Os parâmetros de validação avaliados foram linearidade, seletividade, efeito matriz,
precisão, veracidade, recuperação, limite de decisão, capacidade de detecção, incerteza da
medição, robustez, limite de detecção e de quantificação. Além disso foram observados os
critérios de desempenho aplicáveis à detecção por espectrometria de massas e estabilidade
dos compostos.
A recuperação foi avaliada em 10 μg kg-1
e a veracidade em 5, 10 e 15 μg kg-1
apresentando resultados satisfatórios entre 70 - 85% e 90 - 101%, respectivamente. O limite
de quantificação determinado foi de 2,5 μg kg-1
, exceto para carazolol que foi de 1,25 μg kg-
1
. O estudo de linearidade foi realizado entre 0 e 20 μg kg-1
apresentando coeficientes de
determinação superiores a 0,98. Estes procedimentos foram realizados através de análise
de matriz branca fortificada. Além disso, o presente método foi utilizado para analisar
carazolol, azaperone e azaperol em amostras de ensaio colaborativo de rim suíno,
apresentando resultados muito próximos aos reais.
Portanto, é possível concluir que o método desenvolvido é adequado para análise de
sedativos e β-bloqueadores através de extração dos compostos e limpeza do extrato
eficientes utilizando procedimentos rápidos, fáceis e de baixo custo, garantindo resultados
seguros e confiáveis.
The development of appropriate methodologies that allow the monitoring of residues
and contaminants in food is very important because it is the only way to ensure food safety
preventing damage to the health of the consumer. For this, it is necessary that these
methods are fast, easy and low cost, allowing to detect the presence of residues at low
concentrations and in different matrices.
Is this work a method for determination of 5 sedatives and 14 β-blockers in porcine
kidney samples and subsequent analysis by Liquid Chromatography Coupled with Tandem
Mass Spectrometry (LC-MS/MS) was developed. The extraction procedure consisted in
weighing 2 g of the sample and addition of 10 mL of acetonitrile followed by homogenization
with the Ultra-Turrax and further mechanical agitation. After solvent extraction, the samples
were submitted to two clean-up techniques, freezing the extract at low temperature and
dispersive solid phase extraction (d-SPE) using Celite® 545 as a sorbent. A concentration
step was performed using sample concentrator under a flow of N2 and temperature control.
The dried samples were redissolved with methanol and analyzed using LC-MS/MS system
with Electrospray Ionization (ESI) operating in positive mode (MRM), column Poroshell 120
EC-C18 (3.0 x 50 mm, 2.7 μm) for separation of the analytes and the gradient mobile phase
consisted of (A) aqueous solution acidified with 0.1% formic acid (v/v) and (B) methanol with
0.1% formic acid (v/v).
The validation parameters evaluated were linearity, selectivity, matrix effect,
precision, accuracy, recovery, decision limit, detection capability, measurement uncertainty,
robustness, limit of detection and quantification. Besides the performance criteria applicable
to detection by mass spectrometry and stability of the compounds were observed.
Recovery was estimated at 10 μg kg-1
and accuracy in 5, 10 and 15 μg kg-1 with
results in the range of 70 - 85% and 90-101%, respectively. The limit of quantification this
compounds was 2.5 μg kg-1
, except that carazolol which was 1.25 μg kg-1
. The linearity
ranges were from 0 to 20 mg kg-1 with coefficients of correlation greater than 0.98. These
procedures were performed by analysis of fortified blank matrix. Furthermore, this method
was used to analyze carazolol, azaperone and azaperol in collaborative assay in samples of
porcine kidney, presenting results close to the real.
Therefore, is possible conclude that the method developed is appropriate for the
analysis of β-blockers and sedatives. The extraction and clean-up procedures proved
effective, quick, easy and inexpensive, ensuring safe and reliable results.
