Abstract:
A espécie Brycon orbignyanus é uma espécie de água doce de ampla ocorrência no Brasil,
que devido à construção de barragens, sobrepesca e deterioração do meio ambiente encontra-se
ameaçada de extinção. A criopreservação é uma técnica de armazenamento ao longo prazo do
material genético em baixas temperaturas e que pode ser usado principalmente em casos de perda
de variabilidade genética das populações quando estas se encontram ameaçadas de extinção. O
objetivo deste estudo foi testar novos crioprotetores para a criopreservação do esperma de B.
orbignyanus com o intuito de melhorar os protocolos já existentes. Foram testados crioprotetores
penetrantes e crioprotetores não penetrantes para o congelamento em duas etapas distintas. Na
primeira etapa usamos as amidas dimetilacetamida, dimetilformamida e metilformamida
juntamente com o controle metilglicol (já em uso para esta espécie). Na segunda etapa testamos
os açucares rafinose, trealose, sacarose, lactose e o uso do ATP extracelular contra o controle
(dimetilformamida 7,5%). As amostras descongeladas foram avaliadas por parâmetros de cinética
espermática por Computer Assisted Sêmen Analysis (CASA) e os parâmetros de funcionalidade
celular por citometria de fluxo. Também foi realizada uma analise cienciometrica dos artigos que
publicados entre os anos de 1998-2017 sobre criopreservação visando à conservação da
biodiversidade de peixes, a fim de verificar as tendências de publicações nesta área. Dentre as
amidas testadas verificamos que a dimetilformamida na concentração de 7.5% mostrou melhores
resultados em relação às outras amidas e ao controle atingindo uma motilidade de 66%. Dentre os
açúcares testados a rafinose na concentração de 50 mM demonstrou ser mais eficaz em relação
aos demais sacarídeos atingindo uma motilidade de 42%, apesar de não diferenciar do controle
em relação à motilidade, apresentou menor taxa de fragmentação de DNA. Não foi observado
nenhum beneficio com o uso do ATP. Desta forma recomendamos a dimetilformamida sozinha
ou combinada com a rafinose para a criopreservação do esperma de B. orbignyanus. Também
verificamos de acordo com o levantamento cienciometrico que a criopreservação ainda tem se
focado principalmente em espécies que estão ameaçadas de extinção, mas que possuem algum
interesse econômico.
The species Brycon orbignyanus is a species of fresh water of great occurrence in Brazil,
due to the construction of dams, overfishing and deterioration of the environment it is threatened
with extinction. Cryopreservation is a technique for the long-term storage of genetic material at
low temperatures and can be used mainly in cases of loss of genetic variability of populations
when they are threatened with extinction. The objective of this study was to test new
cryoprotectants for the cryopreservation of B. orbignyanus sperm in order to improve the
existing cryopreservation protocols. Penetrant cryoprotectants and non-penetrating
cryoprotectants were tested for freezing in two distinct stages. In the first step we used the
amides dimethylacetamide, dimethylformamide, metilformamide and methylglycol as control
(already in use for this species). In the second step we tested the sugars: raffinose, trehalose,
sucrose, lactose and the use of extracellular ATP against the control (dimethylformamide 7.5%).
The thawed samples were evaluated for sperm kinetics parameters by Computer Assisted Sperm
Analysis (CASA) and the cell functionality parameters by flow cytometry. A scientometric
analysis of the articles published between 1998 and 2017 about cryopreservation for the
conservation of fish biodiversity was also carried out, in order to verify the trends of publications
in this area. Among the amides tested, it was found that the dimethylformamide at 7.5%
presented better results than the other amides and the control reached 66% of motility. Among
the sugars tested raffinose at 50 mM concentration showed to be more efficient in relation to the
other saccharides reaching a motility of 42%, although not differentiating from the control in
relation to motility, presented a lower rate of DNA fragmentation. No benefit was observed with
the use of ATP. Thus we recommend dimethylformamide alone or in combination with raffinose
for the cryopreservation of B. orbignyanus sperm. We also verified according to the
scientometric survey focused mainly on species that are threatened with extinction, but which
have some economic interest.
