Estudo comparativo do benzo[a]pireno e sua ação fotodinâmica em linhagens celulares, utilizando as radiações uva ou visível

Abstract

O benzo[a]pireno (BaP) é um hidrocarboneto aromático policíclico (PAH) amplamente diststribuído no ambiente e é considerado o mais fototóxico entre os PAHs. Por outro lado, a ação fotodinâmica é a fotooxidação de moléculas biológicas na presença de oxigênio e um fotossensibilizador. Tendo em vista que os PAHs podem agir como fotossensibilizadores, o objetivo deste trabalho foi avaliar a ação fotodinâmica do BaP associado as radiações UVA ou visível (PAR) nas linhagens celulares K562 (células tumorais quimiosensíveis ditas não-MDR) e Lucena (células tumorais quimioresistentes , ditas MDR) através da análise do número de células viáveis e viabilidade celular. Para isso, três tratamentos foram realizados. O primeiro deles, apenas com BaP em diferentes concentrações (1,08; 2,17; 4,34 ou 8,68 μg/mL) sem receber irradiação. E os outros dois, onde as células além do BaP foram irradiadas com 1J/cm² de UVA ou de PAR. Além disso, para a linhagem K562, foi demonstrada a cinética de entrada do BaP e foram realizados testes para verificar a geração de EROs, produção de lipídeos peroxidados (LPO), dano de DNA (DNA-proteína cross-link e quebras no DNA). Para estes testes as células foram incubadas por 18 horas com 2,17μg/mL BaP e irradiadas ou não com 1J/cm² UVA. O número de células viáveis e viabilidade celular foi avaliado pelo método de exclusão por azul de trypan. Os tratamentos com BaP (sem irradiação) não alteraram o número de células viáveis nem a viabilidade para ambas as linhagens celulares (p<0,05). Entretanto, ambos o número de células viáveis e a viabilidade celular foram alterados pelo tratamento BaP+UVA (p>0,05), já para o tratamento de BaP+PAR somente o número de células viáveis diminuiu (p>0,05), o que sugere a ocorrência de inibição de proliferação. Para a linhagem K562, com 18 horas de incubação, houve o maior acúmulo de BaP e ainda para esta linhagem depois da exposição ao BaP+UVA, houve um aumento na peroxidação lípidica (controle 14,343,19; BaP+UVA 54,0811,17 nmol CHP/mg pellet). Quanto a análise de danos de DNA, houve diferença significativa na porcentagem de DNA-proteína cross-link após os tratamentos com BaP, UVA e BaP+UVA quando comparados ao controle (p>0,05) e um aumento nas quebras no DNA nas células tratadas com BaP+UVA (controle: 7,27±2,72; BaP+UVA: 58,61±11,47 score). Sendo assim, sugerimos que os efeitos da associação BaP+UVA foram obtidos pelos dois principais mecanismos da ação fotodinâmica: através do mecanismo tipo II (capaz de produzir oxigênio singlete e danificar preferencialmente DNA) e do mecanismo tipo I (envolvendo outras espécies reativas de oxigênio).