Mecanismos de regulação gênica do sistema de resposta ao dano de DNA induzidos por diferentes agentes genotóxicos em hepatócitos de danio rerio (Cypriniformes, Cyprinidae)

Abstract

O objetivo geral desta tese foi avaliar os efeitos da exposição de hepatócitos de Danio rerio a dois agentes que podem causar danos na molécula de DNA (cobre e radiação UVB) em termos do padrão de expressão de genes relacionados ao sistema de resposta ao dano de DNA. Com relação ao UVB, foi observada uma resposta bifásica na expressão do gene relacionado à parada do ciclo celular CDKI (inibidor de quinase dependente de ciclina do tipo p21) após exposição ao UVB, sendo que a expressão deste gene foi induzida após 6 horas da exposição e inibida 12 horas após, retornando a valores iguais ao controle no tempo 24 horas. A expressão dos demais genes relacionados à parada do ciclo celular (p53, Gadd45a e Ciclina G1) foi induzida apenas no tempo 24 horas após a exposição. O gene que codifica para a proteína anti-apoptótica Bcl-2 apresentou sua expressão diminuída em relação ao grupo controle em todos os tempos analisados. Com relação aos genes que codificam para proteínas envolvidas no reparo propriamente dito do DNA, as maiores induções da expressão foram observadas com os genes XPC e DDB2. Com relação à exposição ao cobre, foi observado um aumento na geração de espécies reativas de oxigênio na maior concentração testada (20 mg Cu/L) após 6, 12 e 24 horas de exposição, sendo que não foi observado um aumento na capacidade antioxidante total em nenhuma concentração testada após 24 horas de exposição. Com relação à expressão gênica, os genes p53 e CDKI apresentaram uma inibição de sua expressão após 12 e 24 horas de exposição apenas nos hepatócitos expostos a 20 mg Cu/L. Neste mesmo grupo, a expressão dos genes Gadd45a, Ciclina G1 e Bax (gene pró-apoptótico) foi induzida após 24 horas de exposição. Por fim, com relação aos genes de reparo de DNA, observou-se um padrão de inibição da expressão em muitos destes genes, principalmente no grupo exposto a 20 mg Cu/L. Como conclusão, os resultados obtidos no presente estudo indicam que a exposição a dois agentes que podem causar danos à molécula de DNA são capazes de alterar o padrão de expressão de diversos genes envolvidos no sistema de resposta ao dano de DNA. Além disso, as respostas observadas são diferentes de acordo com o mecanismo de toxicidade do agente. Neste sentido, a resposta observada após exposição ao UVB parece ser dependente da ativação da proteína p53, enquanto que para a exposição ao cobre a resposta parece estar relacionada a uma inibição da proteína p53 e possível ativação da transcrição de genes-alvo independente desta proteína.