Reprodutibilidade de distintas técnicas associadas à filtração na padronização de inóculo de conídios de Aspergillus fumigatus

Abstract

O objetivo deste estudo foi testar a reprodutibilidade de distintos métodos de padronização de inóculo de Aspergillus fumigatus. Foram utilizadas colônias jovens de A. fumigatus (AF 294) subcultivadas em Agar batata (PDA) por cinco dias a 37ºC. A suspensão foi produzida adicionando-se 10 ml de solução salina estéril acrescida de Tween 20 ® e padronizada em escala 0.5 de Mc Farland e Espectrofotometria. Foi realizada a filtração por filtro Millipore® 5µm como etapa acessória. A confirmação da concentração do inóculo foi realizada através de Spread plate e contagem de conídios em hemocitômetro. Cada experimento foi repetido por cinco vezes. Na padronização por Mc Farland, o valor médio da contagem de conídios foi superior (8,95x104 Con./ml; DP±4,9) ao encontrado após filtração (5,84 x104Con./ml; DP±0,89). Os valores médios de UFC foram mais altos na suspensão não filtrada (96 x103UFC/ml;DP±7,33), frente à filtrada (40x103 UFC/ml; DP±3,32). Na Espectrofotometria, os valores de conídios não diferiram entre a suspensão filtrada (0,35; DP±0,14) e não filtrada (0,3; DP±0,11). Valores de UFC menores foram observados nas suspensões não filtradas (1,5x103UFC/ml; DP±1,41), comparando-se às filtradas (6,1x103UFC/ml DP±4,13). A espectrofotometria apresenta maior confiabilidade e a filtração auxiliou na obtenção de suspensões exclusivamente conidiais.

The aim of the study was to test the reproducibility of different methods of Aspergillus fumigatus standarization inocula.Young colonies of A. fumigatus (AF 294) was used and subcultured on potato agar (PDA) for five days at 37 º C. The suspension was produced by adding 10 ml of sterile saline plus Tween 20 ®. The suspension was standardized on a scale of 0.5 Mc Farland and Spectrometry in both techniques was tested prior to filtration Millipore ® filter 5μm as accessory technique. Confirmation of the inoculum concentration was performed by Spread plate and conidia count by hemocytometer. Each experiment was repeated five times. In counting the conidia in Mc Farland, the average was higher (8,95x104 Con./ml; SD±4,9) compared with the filtration (5,84 x104Con./ml; SD±0,89). The average values of UFC in Spectrophotometry were higher in unfiltered suspension (96 x103UFC/ml;SD±7,33), compared to filtered (40x103 UFC/ml; DP±3,32). In the values tested did not differ between the suspension filtered (0,35; SD±0,14) and unfiltered (0.3; SD±0.11). UFC values lower in unfiltered (1,5x103UFC/ml; SD±1,41), compared to the filtered (6,1x103UFC/ml SD±4,13). To standardize inocula of A. fumigatus conidia, spectrophotometry offers greater reliability, and filtration helps to ensure the attainment of conidial suspensions exclusively.