Toxinas encontradas na anêmona Bunodosoma cangicum capazes de causar morte celular em hepatócitos de Danio rerio em cultura

Abstract

As substâncias bioativas presentes nos animais funcionam como venenos ou toxinas. Durante muito tempo o envenenamento através de toxinas oriundas de animais sempre foi alvo de muitas observações. As substâncias que tem propriedades de atuarem como ferramentas fisiológicas e/ou farmacológicas e trazem algum tipo de benefício à saúde humana, tendem a receber maior atenção. Uma análise dos compostos bioativos oriundos de animais marinhos mostra que a maioria é proveniente de quatro grupos: macroalgas, celenterados, equinodermos e esponjas. Dentre esses grupos, os celenterados ou cnidários, podem ser considerados potenciais fontes de biofármacos como, por exemplo, corais que produzem agentes antibióticos e anêmonas marinhas cujas toxinas agem em canais iônicos. O objetivo deste presente trabalho foi verificar o potencial que as toxinas extraídas de diferentes estruturas das anêmonas possuem em induzir a apoptose de hepatócitos de zebrafish (ZFL). Com este trabalho esclarecemos aspectos importantes da fisiologia destes animais. O fato de a sua toxina ter capacidade de causar apoptose, até então não havia sido evidenciado. Juntamente com isso nosso trabalho mostra substâncias naturais capazes de causar apoptose, fato que é de extrema relevância para as pesquisas futuras em diversas áreas do conhecimento. Anêmonas foram coletadas nos Molhes da Barra, após serem aclimatados no laboratório por uma semana, passou-se para os experimentos. Em nossos testes, utilizamos uma nova metodologia para obtenção de veneno nos fornecendo uma toxina mais pura. Foram realizadas extração de subprodutos de regiões da coluna e dos tentáculos das anêmonas, após as mesmas foram pipetadas sobre células de zebrafish em cultura que ficaram em exposição durante 60 minutos. Logo após analisou-se a morte celular via apoptose em um microscópio invertido de fluorescência. Os resultados mostram que as toxinas encontradas na coluna da anêmona possuem capacidade em causar apoptose em hepatócitos de zebrafish. Estas toxinas estão armazenadas em regiões específicas e não em todo o corpo do animal. Os subprodutos extraídos dos tentáculos não causaram apoptose. Até então não haviam sido levantados dados sobre toxinas da anêmona capazes de causar apoptose. Através da análise morfológica das células foi possível observar sinais característicos de apoptose celular. Este estudo mostra que mesmo após a purificação das toxinas as mesmas são capazes de causar efeito.

We show that the stimulated secretion a mixture of polypeptides from the columnar vesicles of the anemone Bunodosoma cangicum induces apoptosis in the zebrafish cell line, ZF-L. The active peptides are heat labile, react with ninhydrin, and are weakly stained with Coomassie R50. Gel filtration chromatography indicates that the venom mixture probably contains more than one active form. Microscopic and flow cytometric assays confirm the apoptotic activity. PAGE analysis shows the venom only contains low weight peptides and no significant protein. This manuscript is the first report of biologically active peptides associated with columnar vesicles of B. cangicum.