Glutationa Reduzida e Adenosina trifosfato (ATP) na Criopreservação seminal de Tambaqui, Colossoma macropomum

Abstract

O Colossoma macropomum, tem importância ecológica nos ecossistemas amazônicos, pois auxilia na propagação de sementes a longas distâncias. No entanto, o aumento da ação antrópica pelo desmatamento da mata ciliar, construção de barragens e hidrelétricas diminuem a diversidade genética e prejudicam sua reprodução. O aumento da degradação nos ambientes naturais, decorrentes da invasão agrícola, expansão urbana e poluição, tem como consequência a perda da biodiversidade. A criopreservação é uma ótima ferramenta para criação de bancos de germoplasma, pois recupera e preserva espécies ameaçadas de extinção através da conservação de biodiversidade. O objetivo deste estudo foi analisar o efeito de glutationa reduzida (GR) e adenosina trifosfato (ATP) em espermatozoides criopreservados de tambaqui, C. macropomumcom intuito de promover protocolo específico para espécie e garantir gametas de boa qualidade para formação de um banco de germoplasma. As amostras de sêmen foram congeladas nas concentrações de 2, 4 e 6 mM de GR e 7,5; 15 e 30 mM ATP. Os tratamentos foram adicionados ao diluente BTS com DMSO 10% (controle). As amostras descongeladas foram avaliadas quanto a parâmetros de cinética pela Computer Assisted Sêmen Analysis (CASA) e parâmetros de funcionalidade celular por citometria de fluxo. As concentrações GR 2 e 4 mM foram superiores ao controle para o período de motilidade, motilidade total e progressiva e integridade de membrana citoplasmática. Todas as concentrações de GR e ATP tiveram redução gradativa na produção de espécies reativas de oxigênio, sendo que o ATP 15; 22,5 mM e 30 mM, diminuíram 50% ou mais, quando comparado ao controle. Todas as concentrações de GR e ATP não alteraram (P > 0,05) a fragmentação de DNA e a peroxidação lipídica. A fluidez de membrana do GR nas concentrações 4 e 6 mM foram melhores que o controle; e as concentrações de 2 e 4 mM mantiveram com mais eficiência o período de motilidade, motilidade total e progressiva. Dessa forma, indicamos a utilização do diluente BTS com 10% de DMSO adicionado de 4 mM de GR em espermatozoides descongelados de C. macropomum.

The Colossoma macropomum, has ecological importance in the Amazonian ecosystems, it helps in spreading seeds over long distances. However, increased human activities deforestation of riparian vegetation, construction of dams and hydroelectric decrease the genetic diversity and harm reproduction. Increased degradation in natural environments, resulting from agricultural encroachment, pollution and urban expansion, results in the loss of biodiversity. Cryopreservation is a great tool for creating germplasm banks, for recovering and preserving endangered species through biodiversity conservation. The aim of this study was to analyze the effect of reduced glutathione (GR) and adenosine triphosphate (ATP) in cryopreserved sperm of tambaqui, C. macropomum aiming to promote specific protocol for species and ensure good quality gametes for germoplasma bank. Samples of semen were frozen whith 2, 4, 6 mM GR and 7.5, 15, 30 mM ATP. The treatments were added to the BTS diluent with 10% DMSO (control). Thawed samples were evaluated as the kinetic parameters for Computer Assisted Sêmen Analysis (CASA) and cell feature parameters by flow cytometry. GR concentrations of 2 mM and 4 were higher than the control for motility period, total and progressive motility, cell membrane fluidity and integrity. All concentrations of GR and ATP were gradually reduce the production of reactive oxygen species, mainly ATP 15; 22.5 mM and 30 mM, which decreased by 50% or more when compared to the control. All concentrations of GR and ATP isolated did not change (P> 0.05) DNA fragmentation and lipid peroxidation. The GR membrane fluidity at concentrations of 4 mM and 6 were better than the control and the concentrations of 2 and 4 mM maintained more efficiently to motility period, total and progressive motility. Thus, indicate the use of BTS diluent with 10% DMSO added 4 mM GR thawed sperm C. macropomum.