Abstract:
O melanoma cutâneo é um tipo de câncer da pele de pior prognóstico. Assim, a
prevenção e a detecção precoce são as medidas de maior sucesso contra esta
patologia, já que os tratamentos disponíveis são escassos e, quando em estágio
avançado da doença, pouco eficientes. Logo, é importante encontrar tratamentos
alternativos mais eficazes. Entre as diferentes substâncias em estudo para uso como
quimioterápicos, se destacam as substâncias canabinóides que podem apresentar um
perfil de segurança, por seus receptores serem expressos em locais específicos, como
na pele, principalmente em células de melanoma. Outro grupo de compostos que
podem exercer efeitos importantes sobre os organismos são os pirazolínicos
trialometilados, que foram relatados por ter uma ampla gama de aplicações na
farmacologia. Ainda, diversos estudos demonstraram que os canabinóides e os
compostos pirazolínicos trialometilados podem exercer os seus efeitos através da
geração de ROS. Assim, este trabalho teve como objetivo avaliar o envolvimento da
produção de ROS nos efeitos do endocanabinóide oleiletanolamida (OEA) e do seu
análogo pirazolínico denominado pirazolina oléica (OPZ) em células de melanoma da
linhagem B16F10. As células foram mantidas em meio DMEM suplementado. As
concentrações de OEA e OPZ utilizadas foram 50, 125, 250, 375 e 500 µM, e os grupos
controles receberam os mesmos veículos utilizados para solubilizar os compostos em
cada situação experimental. Foram realizados testes de viabilidade celular utilizando o
ensaio colorimétrico de MTT, e avaliação de apoptose e necrose por microscopia de
fluorescência. A geração intracelular de ROS foi avaliada por fluorimetria. Além disso,
α-tocoferol foi utilizado como padrão antioxidante para avaliar o envolvimento de ROS
na resposta celular. Os resultados obtidos mostraram diminuição na viabilidade
celular, com indução de apoptose e necrose, e aumento da geração de ROS com a
utilização da OEA. Já a OPZ causou aumento na proliferação celular e diminuição de
ROS. Além disso, os efeitos do OEA na viabilidade celular foram diminuídos com a
inibição na geração de ROS por α-tocoferol. Assim, é possível sugerir o envolvimento
da geração de ROS no efeito da OEA nas células da linhagem B16F10.
The objective of this work was to evaluate the involvement of ROS production
in the effects of the endocannabinoid oleoyl ethanolamide (OEA) and its pirazolinic
analogue denominated pyrazoline oleic (OPZ) in B16F10 melanoma cell line. The cells
were maintained in DMEM medium supplemented with fetal bovine serum (10%), and
antibiotic and antimycotic (1%). The OEA and OPZ concentrations used were 50, 125,
250, 375 and 500 µM. It was evaluated cell viability using the MTT colorimetric assay,
and apoptosis and necrosis by fluorescent microscopy. The generation of intracellular
ROS was evaluated by fluorimetry. In addition, α-tocopherol antioxidant was used to
evaluate the involvement of ROS in the cellular response. The results showed a
decrease in cell viability, induction of apoptosis and necrosis, and increased generation
of ROS by the use of the OEA. Already OPZ caused increased cell proliferation and
decreased ROS. Moreover, the effects of OEA cell viability was decreased by inhibiting
the generation of ROS by α-tocopherol. Thus, it is possible to suggest the involvement
of ROS generation in the effect of OEA in the cell line B16F10. Considering the great
need to find new substances that can fight melanoma and the lack of greater
elucidation of the mechanisms of action of cannabinoids and their analogues this work
provides new important information that stimulate new studies.
