Determinação de tricotecenos em cerveja e avaliação de incidência no produto comercializado no Rio Grande do Sul

Abstract

Este trabalho adaptou um método e avaliou os seus indicadores de mérito para determinação de tricotecenos, desoxinivalenol (DON)e toxina T-2, em cervejas comercializadas na região Sul do Rio Grande do Sul, empregando cromatografia gasosa. As adaptações foram realizadas na etapa de extração,purificação, derivação e condições cromatográficas usando amostras de cerveja artificialmente contaminadas,avaliando a adequação do procedimento pela recuperação obtida. Foram estudados os solventes acetonitrila, metanol e cloreto de metileno puro ou em misturas para a etapa de extração. A purificação do extrato foi realizada empregando ou não minicoluna de carvão:alumina:celite (7:5:3). Para a derivação testou-se basicidade do meio (bicarbonato de sódio, piridina), agente acilante (TFAA e HFBI), tempo (30 e 60 minutos) e temperatura (60 e 80ºC). Foram otimizadas as condições cromatográficas em cromatógrafo gasoso equipado com injetor split/splitless e detector de ionização de chama. A melhor recuperação foi obtida quando se empregou partição líquido-líquido com cloreto de metileno, seguida da limpeza em minicoluna e derivação com TFAA e piridina a 60°C durante 60 minutos.A recuperação média foi de 83 e 103% para DON e toxina T-2 respectivamente, para níveis de adição entre 50 e 200ng/mL. O coeficiente de variação assumiu valores de 2% e 4% e limite de detecção de 21 e 60 ng/mL. A aplicabilidade do método foi testada em um levantamento realizado em 72 amostras de cervejas. Destas 9,7% estavam contaminadas, sendo 5,3% com DON (50 a 336ng/mL)e 4,5% com toxina T-2 (114 a 249ng/mL).

The present work adapted and evaluated a trichothecenes determination, DON and the T-2 toxin and conduted a survey of the product commercialized in Rio Grande do Sul in beer commercialized in Rio Grande do Sul State by gas chromatography.It studied extraction, purification, derivatization and chromatographic conditions using artificially contaminated samples. Acetonitrile,methylene chloride and methanol pure or in misture were tested for the extraction step. The extract was purified using a carbon:alumina:celite minicolumn (7:5:3). For derivatization, the following conditions were tested: the basicity of the medium (sodioum bicarbonate, pyridine),the derivatizing agent (TFAA and HFBI), reaction time (30 and 60 minutes) and temperature (60 and 80°C). The chromatographic conditions were optimized in a gas chromatograph, with a split/splitless injector and an ionization flame detector.The highest recovery was obtained when liquid-liquid partition was carried out with methylene chloride,followed by cleaning in a minicolumn and derivatization with TFAA and pyridine at a temperature of 60°C for 60 minutes. The average recovery for DON and the T-2 toxin were 83 and 103%, the coefficient variation 1.6 to 4% and the detection limit of 21 and 60ng/mL, respectively. The applicability of the method was tested in a survey carried out in 72 beer samples, 9.7 % of which were contaminated 5.3% with DON (50 to 336ng/mL) and 4.5% with the T-2 toxin (114 to 49ng/mL).