Studies on the Adsorption of Inulinase from Kluyveromyces marxianus ATCC 16045 onto an Ion Exchange Resin

Abstract

The adsorption of an extracellular inulinase directly onto an ion exchange resin from a clarified crude broth was investigated in this work. The enzyme inulinase was obtained from Kluyveromyces marxianus ATCC 16045 by fermentation in shaken flasks in a medium containing peptone, sucrose, yeast extract and K2HPO4 at pH 3.5, 30°C and 150 rpm for 48 hours. The final enzymatic activity was about 72 U mL–1. The crude broth filtrate was used for kinetic studies and for the adsorption isotherm of the extracellular inulinase from Kluyveromyces bulgaricus ATCC 16045 onto an ion exchange resin. The trials were carried out at pH 3.5 and 25°C in stirred tank reactors containing STREAMLINETM SP, developed for expanded bed adsorption. It was observed that the adsorption was well described by the Langmuir isotherm, and the values determined for Qm and Kd were 1,254 U mL–1 and 0.325 UmL–1, respectively. The kinetic parameters k1 (6.52 . 10–3 mL U–1 min) and k2 (2.09. 10–3 min–1) as well as the average values of 1.71 . 10–2 cm s–1 for the film coefficient (Ks) and 6.96 . 10–7 cm2 s–1 for the effective diffusion coefficient (Def), were determined using the experimental results and mathematical modelling.

A adsorção de uma inulinase extracelular em resina de troca iônica diretamente a partir de um caldo filtrado foi investigada neste trabalho. A enzima inulinase foi obtida a partir de fermentação por Kluyveromyces marxianus ATCC 16045 em frascos erlenmeyers com meio contendo peptona, sacarose, extrato de levedura e K2HPO4, a pH 3,5, 30°C, 150 rpm durante 48 horas. A atividade enzimática final foi ao redor de 72 U mL–1. O caldo filtrado foi utilizado para os estudos cinéticos e de obtenção da isoterma de adsorção da inulinase extracelular de Kluyveromyces bulgaricus ATCC 16045 usando resina de troca iônica. Os ensaios foram realizados a pH 3,5 e 25°C em reatores agitados encamisados contendo resina STREAMLINETM SP, material desenvolvido para utilização em colunas de leito expandido. Observou-se que a adsorção pode ser bem descrita pela isoterma de Langmuir, sendo determinado o Qm e o Kd, 1254 U mL–1 e 0,325 U mL–1, respectivamente. Os parâmetros cinéticos k1 (6,52 . 10–3 mL U–1 min) e k2 (2,09. 10–3 min–1) bem como os valores médios 1,71 . 10–2 cm s–1 para o coeficiente de transferência. de massa na película (Ks) e 6,96 . 10–7 cm2 s–1 para o coeficiente de difusão efetiva (Def) foram determinados utilizando os resultados experimentais e modelagem matemática.