Sal de tetrazólio como indicador colorimétrico para a determinação do perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos em cepas de micobactérias não tuberculosas

Abstract

As infecções causadas por micobactérias não tuberculosas (MNT) caracterizam-se por serem oportunistas e de tratamento complexo. Reconhece-se que a identificação do perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos da cepa causadora da infecção é fundamental para a escolha do esquema terapêutico adequado. Nesse cenário, testes de suscetibilidade aos antimicrobianos (TSA) colorimétricos vem se mostrando promissores por possibilitarem uma leitura mais fácil e precisa dos resultados. O objetivo do presente estudo foi avaliar o cloreto de 2,3,5-trifenil tetrazólio (TTC) como indicador colorimétrico de viabilidade celular para a determinação do perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos em cepas de MNT. Para isso, determinou-se o perfil de 34 cepas do complexo Mycobacterium abscessus (CMAB) frente a claritromicina, amicacina, ciprofloxacina, cefoxitina, doxiciclina, moxifloxacina e trimetoprimasulfametoxazol; de 13 cepas do complexo M. avium (CMA) frente a amicacina e claritromicina; e de 7 cepas de M. kansasii frente a claritromicina e rifampicina. As cepas incluídas no estudo estavam armazenadas no Laboratório de Micobactérias da Universidade Federal do Rio Grande e foram submetidas aos ensaios de microdiluição seriada em caldo com TTC e sem TTC (padrão-ouro, com leitura realizada através da visualização da turbidez). Pelo método padrãoouro, as cepas de MNT apresentaram diferentes perfis de suscetibilidade aos antimicrobianos. Ressalta-se que a maioria das cepas de CMAB apresentaram perfil resistente ou intermediário para os antimicrobianos testados, exceto para amicacina (97,1% das cepas foram sensíveis). Por outro lado, apenas uma cepa de CMA e uma de M. kansasii foram resistentes a claritromicina e rifampicina, respectivamente. Para a maioria das cepas de MNT houve concordância entre o ensaio com o TTC e o ensaio padrão-ouro: para ensaios com CMAB, concordância essencial entre 91% e 100% e concordância categórica entre 76% e 100%; para ensaios com CMA, concordância essencial entre 92% e 100% e concordância categórica entre 84% e 100%; e para ensaios com M. kansasii, concordância essencial de 100% e concordância categórica entre 85% e 100%. Além disso, o ensaio com o TTC possibilitou uma visualização e interpretação mais segura e sensível dos resultados. Portanto, trata-se de uma potencial alternativa de TSA para ser utilizada em laboratórios que realizam o diagnóstico de micobacterioses.

Infections caused by nontuberculous mycobacteria (NTM) are characterized by being opportunistic and requiring complex treatment. It is recognized that the identification of the antimicrobial susceptibility profile of the strain causing the infection is essential for choosing the appropriate therapeutic regimen. In this scenario, colorimetric antimicrobial susceptibility testing (AST) have shown to be promising because they allow an easier and more accurate reading of the results. The aim of the present study was to evaluate 2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride (TTC) as a colorimetric indicator of cell viability to determine the antimicrobial susceptibility profile of NTM strains. For this, it was determined the profile of 34 strains of the Mycobacterium abscessus complex (MABC) against clarithromycin, amikacin, ciprofloxacin, cefoxitin, doxycycline, moxifloxacin, and trimethoprim-sulfamethoxazole; of 13 strains of M. avium complex (MAC) against amikacin and clarithromycin; and 7 strains of M. kansasii against clarithromycin and rifampicin. The strains included in the study were stored at the Mycobacterial Laboratory of the Federal University of Rio Grande and were submitted to broth serial microdilution assays with TTC and without TTC (gold standard, with reading performed through the turbidity visualization). By the gold standard method, the NTM strains showed different susceptibility profiles to antimicrobials. It is noteworthy that most MABC strains showed a resistant or intermediate profile for the antimicrobials tested, except for amikacin (97.1% of the strains were susceptible). On the other hand, only one strain of MAC and one of M. kansasii were resistant to clarithromycin and rifampicin, respectively. For most NTM strains there was agreement between the TTC assay and the gold standard assay: for MABC assays, essential agreement between 91% and 100% and categorical agreement between 76% and 100%; for MAC assays, essential agreement between 92% and 100% and categorical agreement between 84% and 100%; and for M. kansasii assays, essential agreement of 100% and categorical agreement between 85% and 100%. In addition, the TTC assay allowed for a safer and sensitive visualization and interpretation of the results. Therefore, it is a potential alternative of AST to be used in laboratories that perform the diagnosis of mycobacteriosis.