Abstract:
O Piaractus mesopotamicus é um peixe amplamente distribuído na América do Sul, sendo encontrado desde a bacia dos rios Paraná-Paraguai até a bacia do Prata. Além de fins comerciais sua produção também é destinada a programas de repovoamento de reservatórios, impactados por hidrelétricas. Pesquisas relacionadas à criopreservação de gametas de peixes têm avançado exponencialmente, isto se deve às suas aplicações e protocolos. Para que o esperma possa ser criopreservado corretamente é necessário que sejam adicionados diluentes e crioprotetores que permitam o armazenamento e proteção das células. O presente estudo teve como objetivo verificar a eficácia de diferentes crioprotetores como: DMSO, glicerol e metanol (5%; 7,5%; 10%; 12,5% e 15%) na criopreservação espermática do Pacu. Foram utilizados 14 machos de P. mesopotamicus, sendo utilizado o BTS como diluente padrão no congelamento de todas as amostras, acompanhado de diferentes crioprotetores. Todos os parâmetros da cinética celular foram avaliados pelo CASA, já a integridade de membrana, fluidez de membrana, integridade funcional de DNA, funcionalidade da mitocôndria, espécies reativas do oxigênio (EROS) e lipoperoxidação (LPO), foram avaliadas através de citometria de fluxo. O diluente com 7,5% de metanol apresentou motilidade total e progressiva maior que os demais tratamentos (P < 0,05), já no período de motilidade (PM) não houve diferença (P > 0,05) do tratamento com 5 % de metanol, entretanto as duas concentrações (5 e 7,5 % de metanol) foram superiores (P < 0,05) aos outros tratamentos. A velocidade média percorrida do tratamento com 7,5 % de metanol foi maior (P < 0,05) que os demais tratamentos, já a velocidade retilínea, distância média percorrida, distância curvilínea e retilínea foram maiores (P < 0,05) nos tratamentos com 7,5 e 10 % de metanol, não diferenciando entre si. O deslocamento lateral de cabeça foi menor (P < 0,05) em todas as concentrações dos tratamentos com metanol. O tratamento com 7,5 % de metanol esteve dentre os tratamentos com melhores resultados nas análises de integridade de membrana e funcionalidade de mitocôndria. Não houve diferença entre os tratamentos nas análises de fluidez de membrana e LPO. Portanto, indica-se o diluente BTS adicionado de 7,5 % de metanol na criopreservação espermática do Piaractus mesopotamicus, Pacu.
The Piaractus mesopotamicusis a fish widely distributed in South America, found from the Paraná-Paraguay rivers bay until the Silver river bay. Beyond commercial purposes, its production is also designated to repopulation of reservoir programs impaired by hydroelectric plants. Researches related to fish gamete cryopreservation has advanced exponentially, due to its applications and protocols. It is necessary for the sperm, to be able for the process of cryopreservation, the addition of diluent and crioprotetor that allows the storage and cell protection. The aim of the present study is to verify the efficiency of different crioprotetor containing DMSO, glycerol and methanol (5%; 7,5%; 10%; 12,5% and 15%) utilized in Pacu sperm cryopreservation. In the present experiment, 14 P. mesopotamicus males were used; BTS were chosen as the standard diluent for cryopreservation in all samples adding the different cryoprotectants to be tested. All the sperm cells kinetic patterns were assessed with CASA and cellular integrity, membrane integrity, membrane fluidity, functional DNA integrity, mitochondrial functionality, reactive oxygen species (ROS) and lipoperoxidation (LPO) were analyzed by flow cytometry. The diluent with 7,5% of methanol presented higher total and progressive motility than the other treatments (P < 0,05), within the motility period (MP) there were no significant differences (P > 0,05) on treatment with 5% of methanol, however two concentrations (5 and 7,5% of methanol) were superior (P < 0,05) than the other treatments. The average speed traveled of 7,5% methanol treatment were greater than the other treatments (P < 0,05); now rectilinear velocity, average distance traveled, curvilinear and rectilinear distance were larger (P < 0,05) in 7,5 and 10% of methanol treatments, non243 differentiated in between. The lateral dislocation of the head were smaller (P < 0,05) in all concentrations of the methanol treatments. The 7,5% methanol treatment was among the best result treatments in membrane integrity and mitochondrial functionality analysis. There were no differences between treatments within the membrane fluidity and LPO assay. Therefore, the addition of 7,5% methanol in BTS diluent is indicated to perform Piaractus mesopotamicus (Pacu) sperm cryopreservation.
