Abstract:
As proteínas ABC (ATP-binding cassete) são ATPases inespecíficas localizadas na membrana celular de diferentes tecidos animais, sendo reconhecidas primordialmente por realizar o efluxo de xenobióticos e produtos do metabolismo celular modulando assim concentração de toxinas intracelulares nos organismos. Ao acoplar a energia da hidrólise do ATP, as ABC transportam uma grande variedade de substâncias citotóxicas do citosol para o meio extracelular. No que corresponde a sua caracterização, dados concisos acerca da expressão gênica e proteica, localização e função elucidam parte do conhecimento sobre a biologia destes transportadores, entretanto, a via de sinalização que regula a ativação permanece em debate. Este trabalho teve por objetivo avaliar se as oscilações do íon cálcio (Ca2+) e o aumento de atividade das proteínas cinases dependentes de cálcio (cPKC) participam da ativação dos transportadores ABC na linhagem ZF-L (hepatócitos de zebrafish). As células foram expostas a condições de baixa disponibilidade de Ca2+ intracelular (Dantrolene 10mM e Bapta-AM 5µM), zero cálcio no meio extracelular (meio livre de Ca2+ com EGTA), alta disponibilidade intracelular de Ca2+ (Cafeína 20mM) e incremento da ativação das cPKC (PMA 200mM) avaliando-se a atividade de efluxo das ABC em cada condição experimental. O efluxo das ABCs foi mensurado através do ensaio com Rodamina B 5µM. As condições experimentais que apresentaram as maiores taxas de efluxo foram observadas durante a alta disponibilidade de cálcio e ativação de cPKC, sugerindo que o aumento da disponibilidade intracelular de Ca2+ estárelacionada com o aumento na atividade de efluxo dos transportadores ABC, apontando a fosforilação via cPKC como possível constituinte da via de sinalização de ativação das ABC na linhagem ZF-L.
ABC (ATP-Binding Cassette) proteins are nonspecific acting in the cell membrane of different animal tissues, being recognized primarily by performing the eflux of xenobiotics and products of the cellular metabolism thus modulating concentration of intracellular toxins in the organisms. By coupling the energy from ATP hydrolysis, ABCs carry a wide variety of cytotoxic substances from cytosol to the extracellular medium. As regards its characterization, concise data on gene and protein expression, location and function elucidate part of the knowledge about the biology of these carriers, however, the signaling route that regulates the activation remains in dispute. The objective of this work was to assess whether calcium oscillations (CA2 +) and the increase of activity of calcium-dependent kinases (cPKC) proteins participate in the activation of ABC conveyors in ZF-L lineage (zebrafish hepatocytes). Cells were exposed to conditions of low availability of intracellular CA2 + (Dantrolene 10mm and Bapta-AM 5?m), zero calcium in the extracellular medium (free Ca2 + medium with EGTA), high intracellular availability of Ca2 + (Caffeine 20mm) and increased activation cPKC (PMA 200mm) evaluating the efflux activity of ABCs in each experimental condition. ABCS efflux was measured by testing with Rodamine B 5?m. The experimental conditions that presented the highest efflux rates were observed during the high availability of calcium and cPKC activation, suggesting that increased intracellular availability of CA2 + sterily with the increase in the efflux activity of ABC conveyors, pointing to phosphorylation via cPKC as Possible constituent of the ABC activation signaling pathway in the ZF-L lineage.
