Efeitos do canabinóide oleiletanolamida e seu derivado sintético em células de melanoma

Abstract

O melanoma cutâneo é um tipo de câncer da pele de pior prognóstico. Assim, a prevenção e a detecção precoce são as medidas de maior sucesso contra esta patologia, já que os tratamentos disponíveis são escassos e, quando em estágio avançado da doença, pouco eficientes. Logo, é importante encontrar tratamentos alternativos mais eficazes. Entre as diferentes substâncias em estudo para uso como quimioterápicos, se destacam as substâncias canabinóides que podem apresentar um perfil de segurança, por seus receptores serem expressos em locais específicos, como na pele, principalmente em células de melanoma. Outro grupo de compostos que podem exercer efeitos importantes sobre os organismos são os pirazolínicos trialometilados, que foram relatados por ter uma ampla gama de aplicações na farmacologia. Ainda, diversos estudos demonstraram que os canabinóides e os compostos pirazolínicos trialometilados podem exercer os seus efeitos através da geração de ROS. Assim, este trabalho teve como objetivo avaliar o envolvimento da produção de ROS nos efeitos do endocanabinóide oleiletanolamida (OEA) e do seu análogo pirazolínico denominado pirazolina oléica (OPZ) em células de melanoma da linhagem B16F10. As células foram mantidas em meio DMEM suplementado. As concentrações de OEA e OPZ utilizadas foram 50, 125, 250, 375 e 500 µM, e os grupos controles receberam os mesmos veículos utilizados para solubilizar os compostos em cada situação experimental. Foram realizados testes de viabilidade celular utilizando o ensaio colorimétrico de MTT, e avaliação de apoptose e necrose por microscopia de fluorescência. A geração intracelular de ROS foi avaliada por fluorimetria. Além disso, α-tocoferol foi utilizado como padrão antioxidante para avaliar o envolvimento de ROS na resposta celular. Os resultados obtidos mostraram diminuição na viabilidade celular, com indução de apoptose e necrose, e aumento da geração de ROS com a utilização da OEA. Já a OPZ causou aumento na proliferação celular e diminuição de ROS. Além disso, os efeitos do OEA na viabilidade celular foram diminuídos com a inibição na geração de ROS por α-tocoferol. Assim, é possível sugerir o envolvimento da geração de ROS no efeito da OEA nas células da linhagem B16F10.

The objective of this work was to evaluate the involvement of ROS production in the effects of the endocannabinoid oleoyl ethanolamide (OEA) and its pirazolinic analogue denominated pyrazoline oleic (OPZ) in B16F10 melanoma cell line. The cells were maintained in DMEM medium supplemented with fetal bovine serum (10%), and antibiotic and antimycotic (1%). The OEA and OPZ concentrations used were 50, 125, 250, 375 and 500 µM. It was evaluated cell viability using the MTT colorimetric assay, and apoptosis and necrosis by fluorescent microscopy. The generation of intracellular ROS was evaluated by fluorimetry. In addition, α-tocopherol antioxidant was used to evaluate the involvement of ROS in the cellular response. The results showed a decrease in cell viability, induction of apoptosis and necrosis, and increased generation of ROS by the use of the OEA. Already OPZ caused increased cell proliferation and decreased ROS. Moreover, the effects of OEA cell viability was decreased by inhibiting the generation of ROS by α-tocopherol. Thus, it is possible to suggest the involvement of ROS generation in the effect of OEA in the cell line B16F10. Considering the great need to find new substances that can fight melanoma and the lack of greater elucidation of the mechanisms of action of cannabinoids and their analogues this work provides new important information that stimulate new studies.