Desenvolvimento de método para determinação de resíduos de sedativos e B-bloqueadores em rim por LC-MS/MS

Abstract

O desenvolvimento de métodos adequados que permitam o monitoramento de resíduos e contaminantes em alimentos é de suma importância pois é a única forma de garantir a segurança dos alimentos evitando danos à saúde do consumidor. Para isso, fazse necessário que estes métodos sejam rápidos, fáceis e de baixo custo, capazes de detectar a presença de resíduos em concentrações baixas e em diferentes matrizes. Este trabalho consistiu no desenvolvimento de método para determinação de 5 sedativos e 14 β-bloqueadores em amostras de rim suíno e posterior análise por Cromatografia Líquida Acoplada à Espectrometria de Massas em Série (LC-MS/MS). O procedimento de extração que melhor se adequou para análise destes compostos consistiu na pesagem de 2 g de amostra e adição de 10 mL de acetonitrila seguida de homogeneização com auxílio de Ultra-Turrax e mesa agitadora. Após extração, as amostras foram submetidas a duas técnicas de clean-up, sendo elas, congelamento do extrato à baixa temperatura e extração em fase sólida dispersiva (d-SPE) utilizando como sorvente Celite® 545. Uma etapa de concentração foi realizada com auxílio de concentrador de amostras sob fluxo de N2 e temperatura controlada. As amostras secas foram retomadas com metanol e analisadas utilizando sistema LC-MS/MS com Ionização por Eletrospray (ESI), operando no modo MRM positivo, coluna Poroshell 120 EC-C18 (3,0 x 50 mm, 2,7 μm) para separação dos analitos, e gradiente de fase móvel composta por (A) solução aquosa acidificada com 0,1% de ácido fórmico (v/v) e (B) metanol 0,1% ácido fórmico (v/v). Os parâmetros de validação avaliados foram linearidade, seletividade, efeito matriz, precisão, veracidade, recuperação, limite de decisão, capacidade de detecção, incerteza da medição, robustez, limite de detecção e de quantificação. Além disso foram observados os critérios de desempenho aplicáveis à detecção por espectrometria de massas e estabilidade dos compostos. A recuperação foi avaliada em 10 μg kg-1 e a veracidade em 5, 10 e 15 μg kg-1 apresentando resultados satisfatórios entre 70 - 85% e 90 - 101%, respectivamente. O limite de quantificação determinado foi de 2,5 μg kg-1 , exceto para carazolol que foi de 1,25 μg kg- 1 . O estudo de linearidade foi realizado entre 0 e 20 μg kg-1 apresentando coeficientes de determinação superiores a 0,98. Estes procedimentos foram realizados através de análise de matriz branca fortificada. Além disso, o presente método foi utilizado para analisar carazolol, azaperone e azaperol em amostras de ensaio colaborativo de rim suíno, apresentando resultados muito próximos aos reais. Portanto, é possível concluir que o método desenvolvido é adequado para análise de sedativos e β-bloqueadores através de extração dos compostos e limpeza do extrato eficientes utilizando procedimentos rápidos, fáceis e de baixo custo, garantindo resultados seguros e confiáveis.

The development of appropriate methodologies that allow the monitoring of residues and contaminants in food is very important because it is the only way to ensure food safety preventing damage to the health of the consumer. For this, it is necessary that these methods are fast, easy and low cost, allowing to detect the presence of residues at low concentrations and in different matrices. Is this work a method for determination of 5 sedatives and 14 β-blockers in porcine kidney samples and subsequent analysis by Liquid Chromatography Coupled with Tandem Mass Spectrometry (LC-MS/MS) was developed. The extraction procedure consisted in weighing 2 g of the sample and addition of 10 mL of acetonitrile followed by homogenization with the Ultra-Turrax and further mechanical agitation. After solvent extraction, the samples were submitted to two clean-up techniques, freezing the extract at low temperature and dispersive solid phase extraction (d-SPE) using Celite® 545 as a sorbent. A concentration step was performed using sample concentrator under a flow of N2 and temperature control. The dried samples were redissolved with methanol and analyzed using LC-MS/MS system with Electrospray Ionization (ESI) operating in positive mode (MRM), column Poroshell 120 EC-C18 (3.0 x 50 mm, 2.7 μm) for separation of the analytes and the gradient mobile phase consisted of (A) aqueous solution acidified with 0.1% formic acid (v/v) and (B) methanol with 0.1% formic acid (v/v). The validation parameters evaluated were linearity, selectivity, matrix effect, precision, accuracy, recovery, decision limit, detection capability, measurement uncertainty, robustness, limit of detection and quantification. Besides the performance criteria applicable to detection by mass spectrometry and stability of the compounds were observed. Recovery was estimated at 10 μg kg-1 and accuracy in 5, 10 and 15 μg kg-1 with results in the range of 70 - 85% and 90-101%, respectively. The limit of quantification this compounds was 2.5 μg kg-1 , except that carazolol which was 1.25 μg kg-1 . The linearity ranges were from 0 to 20 mg kg-1 with coefficients of correlation greater than 0.98. These procedures were performed by analysis of fortified blank matrix. Furthermore, this method was used to analyze carazolol, azaperone and azaperol in collaborative assay in samples of porcine kidney, presenting results close to the real. Therefore, is possible conclude that the method developed is appropriate for the analysis of β-blockers and sedatives. The extraction and clean-up procedures proved effective, quick, easy and inexpensive, ensuring safe and reliable results.