Abstract:
As aflatoxinas compõem uma importante classe de micotoxinas, devido a sua presença e magnitude de contaminação em alimentos destinados ao consumo humano e animal. A partir da observação de que mamíferos que consomem ração contaminada com AFLAB1 (aflatoxinas B1) podem excretar AFLAM1 (aflatoxinas M1) em seu leite, faz-se necessário o desenvolvimento de métodos seguros e confiáveis para análise e controle deste contaminante. Neste trabalho foi validado um método para análise de AFLAM1e AFLAB1 em leite UAT (ultra alta temperatura) integral, desnatado, semi desnatado, em pó e para uso infantil, comercializados em Rio Grande – RS (Brasil) e na Cidade de Assomada (Cabo Verde), baseado no método de QuEChERS e CLAE – FD (cromatografia líquida de alta eficiência com detecção de fluorescência). Para quantificar os níveis de aflatoxinas nas amostras usou-se uma curva de calibração na matriz, onde o e feito da matriz foi 61% e 96% para AFLAM1 e AFLAB1, respectivamente. Os LDm e LQm (limite de detecção e quantificação do método) foram 0,013 e 0,043 ng mL-1 para AFLAM1, 0,06 e 0,10 ng mL-1 para AFLAB1, respectivamente. Os valores de recuperação para o método de extração das aflatoxinas foram de 100 - 105%, para AFLAM1 e 89 - 120% para AFLAB1. Em seguida ao desenvolvimento e validação do método analítico, foi realizado um estudo de ocorrência de aflatoxinas em amostras de leite fluido e de leite em pó. Um total de 112 amostras de diferentes marcas foram coletadas, sendo que as amostras de Rio grande – R S ( Brasil) foram 26 amostras de leite UAT integral, 11 de leite desnatado, 12 de leite semidesnatado, 10 de leite em pó integral, 3 de leite em pó para uso infantil e 50 amostras de leite em pó integral, de três marcas diferentes oriundas da cidade de Assomada (Cabo Verde).Nas amostras de leites comercializadas na cidade de Rio Grande (RS), foi encontrada contaminação por AFLAM1 em 68% das amostras em uma faixa de 0,04 – 3,67 ng mL-1, onde 42% destas amostras excederam o LMT pelo Brasil (0,5 ng mL-1). Para AFLAB1 verificou-se uma contaminação em 24% das amostras em uma faixa de concentração de 0,1 – 0,6 ng mL-1. Para as 50 amostras de leites em pó comercializadas em Cabo Verde os níveis de AFLAM1 determinados foram na faixa de 0,24 – 20,3 μg kg-1, onde 12% da marca I, 38% da marca II, e 83% da marca III, excederam o LMT pela ANVISA. O nível de ingestão diária estimado foi de 1,7 ng kg-1 pc-1 dia-1 e 0,6 ng kg-1 pc-1 dia-1 para AFLAM1 e AFLAB1, nas amostras de leite cidade de Rio Grande (RS), enquanto que nas amostras de leite da cidade de Assomada (Cabo Verde) foi de 2,4 ng kg-1 pc-1 dia-1 para AFLAM1. Conclui-se que o método validado foi adequado para determinação da ocorrência das micotoxinas nas diferentes amostras e que a incidência de AFLAM1 no leite consumido nas duas regiões é alto, merecendo uma atenção das autoridades locais.
Aflatoxins make up an important class of mycotoxins, due to their presence and magnitude of contamination in food destined for human and animal consumption. From the observation that mammals that consume rations contaminated with AFLAB1 (aflatoxins B1) can excrete AFLAM1 (aflatoxins M1) in their milk, it is necessary to develop safe and reliable methods for the analysis and control of this contaminant. In this work a method for the analysis of AFLAM1 and AFLAB1 in UHT milk (ultra high temperature), skimmed, semi - skimmed, powdered and for infant use was commercialized in Rio Grande - RS (Brazil) and in the City of Assomada ), based on the method of QuEChERS and HPLC - FLD (high performance liquid chromatography with fluorescence detection). To quantify aflatoxin levels in the samples, a calibration curve was used in the matrix, where the matrix effect was 61% and 96% for AFLAM1 and AFLAB1, respectively. The LDm and LQm (limit of detection and quantification of the method) were 0.013 and 0.043 ng mL-1 for AFLAM1, 0.06 and 0.10 ng mL-1 for AFLAB1, respectively. The recovery values for the aflatoxin extraction method were 100 - 105% for AFLAM1 and 89 - 120% for AFLAB1. After the development and validation of the analytical method, a study of the occurrence of aflatoxins in fluid milk and powdered milk samples was carried out. A total of 112 samples of different brands were collected, and the samples from Rio Grande - RS (Brazil) were 26 samples of UHT whole milk, 11 of skimmed milk, 12 of semi-skimmed milk, 10 of whole milk powder, 3 of milk powder for infant use and 50 samples of whole milk powder from three different brands from the city of Assomada (Cape Verde). In the samples of milks commercialized in the city of Rio Grande (RS), AFLAM1contamination was found in 68% of the samples in a range of 0.04 - 3.67 ng mL-1, where 42% of these samples exceeded the LMT by Brazil (0.5 ng mL-1). For AFLAB1a 24% contamination of the samples was found in a concentration range of 0.1 - 0.6 ng mL-1. For the 50 samples of powdered milks commercialized in Cape Verde, the levels of AFLAM1 determined were in the range of 0.24 -20.3 μg kg-1, where 12% of brand I, 38% of brand II, and 83% of brand III, exceeded the LMT by ANVISA. The estimated daily intake level was 1.7 ng kg-1 pc-1 day-1 and 0.6 ng kg-1 pc-1 day-1 for AFLAM1 and AFLAB1 in milk samples from the city of Rio Grande (RS), whereas in milk samples from the city of Assomada (Cape Verde) it was 2.4 ng kg-1 pc-1day-1 for AFLAM1. It is concluded that the validated method was adequate to determine the occurrence of mycotoxins in the different samples and that the incidence of AFLAM1in the milk consumed in both regions is high, deserving attention of the local authorities.
