Prospecção de genes relacionados com o crescimento do camarão-rosa Farfantepenaeus paulensis

Abstract

Na primeira etapa deste estudo, foram realizados experimentos para avaliar o crescimento e sobrevivência de camarões nativos do sul do Brasil, da espécie Farfantepenaeus paulensis, cultivados em diferentes salinidades. Para isso, grupos de 200 PL47 (pós-larvas com idade de 47 dias), com peso inicial médio (±DP) de 0,022 g (±0,008), produzidas na Estação Marinha de Aquacultura (FURG) foram cultivadas durante 60 dias em gaiolas (1m3 ) suspensas em dois tanques com 20.000 L de água, nas salinidades 5 e 30. Os níveis de salinidade foram considerados diferentes tratamentos, os quais contaram com três repetições cada. Os camarões foram alimentados ad libitum, com uma ração comercial fornecida duas vezes ao dia em bandejas. As médias (±DP) de temperatura, pH, oxigênio dissolvido e amônia total (N-AT) foram 25,5C (±1,9); 8,07 (±0,13); 5,16 mg/L (±1,07) e 0,042 mg/L (±0,013), respectivamente, sendo estes valores considerados aceitáveis para esta espécie. Ao final do experimento, os camarões foram contados e pesados, apresentando uma sobrevivência média, para ambos tratamentos, de 97%. Os resultados obtidos demonstraram um peso final significativamente maior (P<0,05, ANOVA seguida pelo teste de Tukey) dos camarões aclimatados na salinidade mais baixa, com médias (±DP) de peso final iguais a 1,08 g (±0,3) e 0,62 g (±0,15) na salinidade 30. Estes resultados provavelmente refletem a ação de genes induzidos pela baixa salinidade que também têm efeito sobre o crescimento. Dando prosseguimento ao trabalho, os cinco camarões mais leves e os cinco mais pesados de cada repetição foram imediatamente congelados em nitrogênio líquido para a etapa posterior. Na segunda fase deste trabalho, foi realizado um estudo de prospecção gênica utilizando os organismos que apresentaram um crescimento diferenciado, com o objetivo de identificar genes relacionados com o processo de crescimento e tolerância à salinidade. O método testado foi uma adaptação da técnica usual de análise da expressão diferencial de genes, através da transcrição reversa do RNA total seguida pela reação em cadeia da polimerase (DDRT-PCR). Utilizando-se os tecidos criopreservados dos camarões, foi extraído o RNA total e produzidos os respectivos DNAs complementares (cDNAs). A partir da comparação entre os genes transcritos nas duas classes de tamanho, foram identificados genes com expressão diferencial na comparação entre indivíduos grandes e pequenos. Dois destes genes, até então desconhecidos para o camarão-rosa (ciclofilina e hemocianina), foram isolados, clonados, sequenciados e comparados com genes de v outras espécies armazenados no Banco Mundial de genes (Genbank). Os resultados obtidos neste estudo demonstram a viabilidade da metodologia utilizada na identificação de genes relacionados com características importantes para a aqüicultura.This work evaluated growth and survival of a native penaeid shrimp reared in different salinities. Groups of 200 PL47 (post-larvae with 47 days old) of Farfantepenaeus paulensis with average initial weight (±SD) of 0,022 g (±0,008), produced at Estação Marinha de Aquacultura of Fundação Universidade Federal do Rio Grande - Brazil, were cultivated along 60 days in 1m3 cages inside two tanks of 20.000 L, with salinities 5 and 30. Salinity levels were considered different treatments, with three replicates each. Shrimps were fed ad libitum in trays, with a commercial diet supplied two times at day. Averages (±SD) of temperature, pH, dissolved oxygen and total ammonia (TAN; NH4 - + NH3) were 25,5 (±1,9); 8,07 (±0,13); 5,16 mg/L (±1,07) and 0,042 mg/L (±0,013), respectively, values considered acceptable for the species. At the end of experiment, individually counted shrimps were weighed, presenting a survival of 97% for both treatments. Results demonstrated a significant increase of weight (ANOVA; P<0,05) of the shrimps acclimated in low salinity, with averages (±SD) of final weight 1,08 g (±0,3), and 0,62 g (±0,15) in high salinity. These results probably reflect the action of genes induced by low salinity that also have an effect on growth. Continuing the work, five lighter and five heavier shrimps of each replicate were immediately frozen in liquid nitrogen. In the second phase, a study of gene prospection was carried out using animals that presented differentiated growth, with objective of identifying genes related with the processes of growth and salinity tolerance. An adapted method of differential display reverse transcriptase - polimerase chain reaction (DDRT-PCR) was used. From criopreserved tissues of shrimps, total RNA was extracted and complementary DNA produced (cDNA). From the comparison between transcribed genes of large and small size classes animals, differential expressed genes were identified. Two of these genes, ciclophilin and hemocyanin, unknown for the pink shrimp, were isolated, cloned, sequenciated and compared with genes of other species in GenBank. Results demonstrated the viability of the methodology used to identify genes with important traces to aquaculture.